產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
一步游離生物素清除試劑盒
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貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品規格 |
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BJ101 |
BcMag? 一步法生物素清除磁珠 |
1 ml |
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BJ102 |
BcMag? 一步法生物素清除磁珠 |
5 ml |
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產(chǎn)品信息 |
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組成 |
二氧化硅基質(zhì)，表面覆蓋有高密度專(zhuān)有化學(xué)基團的磁珠 |
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穩定性 |
短期保存 (<1小時(shí)): pH 3-11; 長(cháng)期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 可溶于大多數有機溶劑 |
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磁化強度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類(lèi)型 |
超順磁 |
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成分 |
100 mg / ml溶于 0.2 M磷酸鈉，pH7.5，0.3 M NaCl |
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儲存 |
室溫運輸，收到后保存在 4°C . |
簡(jiǎn)介
生物素，也稱(chēng)為維生素H，是一種在生物樣品中不常見(jiàn)的小分子。它對抗生物素蛋白（Ka=10 ^ 15）和鏈霉親和素（Ka=10 ^ 14）具有顯著(zhù)的結合能力，使得生物素化分子如蛋白質(zhì)或其他分子對于靶分子的非放射性檢測和純化非常適用。
生物素化是一種使用酶或化學(xué)方法將生物素共價(jià)連接到蛋白質(zhì)，核酸，碳水化合物或其他分子上的過(guò)程。該過(guò)程的目的是將生物素分子連接到一個(gè)分子上，產(chǎn)生了一個(gè)附著(zhù)有生物素的生物素化分子。然而，生物素化過(guò)程后樣品中可能會(huì )殘留一定量的游離生物素，這可能導致非特異性結合并導致高背景影響。因此，從樣品中去除游離生物素對于成功的下游應用至關(guān)重要。
為了消除樣品中過(guò)量的生物素，通常使用透析或離心柱等常規技術(shù)。然而，這些方法有一定的缺點(diǎn)，包括由于蛋白質(zhì)沉淀，多重緩沖液交換，轉移步驟，長(cháng)時(shí)間的操作過(guò)程以及難以進(jìn)行小體積樣品或高通量自動(dòng)化而導致樣品丟失。
為了克服這些問(wèn)題，我公司開(kāi)發(fā)了一種新的高效生物素去除方式。
BcMag ? 一步法游離生物素清除試劑盒使用經(jīng)過(guò)專(zhuān)有化學(xué)修飾的磁珠從樣品中去除游離生物素。磁珠可以快速有效地從超低體積的蛋白質(zhì)/多肽或DNA/RNA溶液中去除游離生物素。磁珠還可以在不到10分鐘的時(shí)間內同時(shí)處理96個(gè)樣品。
使用磁珠快速有效地從樣品中去除游離生物素的操作非常簡(jiǎn)單。
1將磁珠直接添加到樣品中。
2通過(guò)移液或渦旋，捕獲游離生物素。
3將磁珠與蛋白質(zhì)或DNA/RNA的溶液通過(guò)磁性分離，而蛋白質(zhì)或DNA/RNA保留在溶液中。
與標準滴注柱和分批方法相比，操作簡(jiǎn)單的磁珠法顯著(zhù)改善了實(shí)驗結果，將蛋白質(zhì)損失降低到最?。?/span><10%）。由于僅使用少量磁珠，因此樣品的最終蛋白質(zhì)濃度不會(huì )顯著(zhù)降低。
特點(diǎn)和優(yōu)勢
l 簡(jiǎn)單的方案：無(wú)需液體轉移，一管，一步，一分鐘操作方案
l 操作方便
l 可靠且可重復的結果，極高的回收率>90%，蛋白質(zhì)（>6 kDa，抑肽酶）或DNA/RNA（>25-mer dsDNA）
l 極佳的清除效果：去除95%游離生物素
l 成本效益：無(wú)需使用色譜柱、過(guò)濾器和費力的重復移液
l 高通量：與許多不同的自動(dòng)化液體處理系統兼容
使用協(xié)議
使用者需準備材料
A．儀器
l 磁力架（適用于手動(dòng)操作）
BcMag? separator-2 適用于兩個(gè)單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6 適用于六個(gè)單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24 適用于24個(gè)單獨的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50 適用于1個(gè)單獨的50毫升離心管，1個(gè)單獨的15毫升離
心管, 以及4個(gè) 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
l 用于大規模純化的康寧430825細胞培養瓶（Cole Parmer，目錄號EW-01936-22）
操作過(guò)程
以下實(shí)驗僅為個(gè)例。磁珠和樣品體積可以合理放大（或縮?。?。不要使用含有有機溶劑的緩沖液。
1震動(dòng)試劑瓶，使磁珠完全重新懸浮，直至均勻。
重要提示：
l 分液前必須將磁珠混合。
l 在分液完成前，不要讓磁珠溶液靜置停留超過(guò)2分鐘。每2分鐘重新懸浮一次磁珠。
2.向含有游離生物素的樣品中加入適量的磁珠。
重要提示：用戶(hù)需要根據磁珠結合能力（約1500 pmol生物素/ml磁珠**），優(yōu)化磁珠和游離生物素樣品的加入比例。結合能力測定條件：將10μl磁珠（100 mg/ml）與100μl含有生物素的蛋白質(zhì)樣品（人血清的1:400稀釋液）在0.1M磷酸鈉，0.15M NaCl，pH7.5緩沖液中混合，并以2000 rpm渦旋5分鐘）
3將樣品與磁珠混合1-2分鐘，緩慢上下移液20-25次，或在PCR板上以2000 rpm旋轉5分鐘，或在微孔板上以800 rpm旋轉5分鐘。
重要提示：如果使用渦旋混勻器，用戶(hù)應優(yōu)化渦旋速度和時(shí)間。
4將樣品板或試管放在磁力分離器上30秒或直到溶液澄清。
5將樣品板保持在磁分離器上，把上清液轉移到干凈的板/管中。該樣本已純化好用于下游應用。
