產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
可分離式鏈酶親和素磁珠
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MMI 107 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
2ml |
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MMI 108 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
5ml |
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MMI 109 |
BcMag? 可分離式鏈酶親和素磁珠 |
10ml |
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如需大量訂購，請聯(lián)系我們報價(jià)！ |
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產(chǎn)品屬性 |
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磁珠大小 |
直徑~ 2.5 μm |
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磁珠密度 |
~10 x 107 beads/mg ( 2.5μm) |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類(lèi)型 |
超順磁性 |
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濃度 |
10 mg/ml (10mM Tris, 0.15 M NaCl,0.1% BSA,1 mM EDTA, pH7.4, 0.01% NaN3) |
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結合能力 |
生物素化BSA / 每毫升磁珠 |
>1mg/ml |
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生物素化單鏈核苷酸 |
~ 2,000 pmoles /ml |
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儲存 |
室溫運輸，4℃儲存. 不可冷凍 |
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BcMag? Cleavable Streptavidin Magnetic Beads是表面覆蓋有高純度（>97%）鏈酶親和素的二氧化硅基質(zhì)的超順磁性磁珠。由于鏈酶親和素通過(guò)內置的可切割二硫鍵連接物（圖1）與磁珠連接，因此，可用還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）從磁珠上切割并分離出鏈酶親和素-生物素化分子的復合物，而不需要像親和純化一樣，在純化后使用苛刻的洗脫試劑（如8M胍或SDS洗滌劑）洗脫目標產(chǎn)物（圖1）。這款磁珠經(jīng)過(guò)專(zhuān)門(mén)設計和測試，可用于免疫沉淀、細胞分選以及從細胞裂解物或雜交反應中快速捕獲目標分子，如DNA、RNA、抗體或蛋白質(zhì)等。
鏈霉親和素和生物素之間表現出的相互作用，是已知的最高非共價(jià)相互作用之一?？股锼?、鏈霉親和素、單體抗生物素及其類(lèi)似物已成為探針和親和配體的有力工具，廣泛應用于生化分析、疾病診斷、親和純化和藥物遞送。鏈霉親和素是一種四聚體生物素結合蛋白，來(lái)源于親和素鏈霉菌，分子質(zhì)量為60000道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物結構，pI值較低，非特異性結合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測系統的理想選擇試劑。
特點(diǎn)及優(yōu)勢
鏈霉親和素-生物素結合系統的優(yōu)勢和益處
l 極高的親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物素結合親和力，具有KD～
10?14米。
l 高穩定性：生物素結合復合物具有良好的穩定性，可抵抗極端pH值、溫度（2°C和
40°C）、極端的有機溶劑環(huán)境、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如SDS）和
蛋白水解酶。
l 突出的選擇性和特異性：生物素和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，可極大降
低非特異性結合概率。
l 高靈敏度：高穩定性和特異性確保了極高的檢測靈敏度。
l 靈活性：生物素體積小的特點(diǎn)和顯著(zhù)的穩定性被證明非常適用于結合各種分子，例如
合成聚合物、熒光團、與小分子或生物分子中的特定位置結合，從而對共軛生物分子的結構和功能施加最小的干擾。
使用鏈霉親和素磁珠的優(yōu)點(diǎn)和益處
l 容易從磁珠上洗脫出生物素化分子--鏈霉親和素的復合物
l 快速、簡(jiǎn)單、一步式的高通量操作過(guò)程：不需要離心柱或過(guò)濾器，或費時(shí)費力的重復移液或離心
l 極高的結合能力
l 非常低的非特異性結合率
l 可根據需要調整反應體積的大小，適用于自動(dòng)化操作
操作協(xié)議
所需耗材
l Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4
l 磁力分離器（適用于手動(dòng)操作）：根據實(shí)驗時(shí)生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號的磁力分離器：
BcMag? separator-2可以容納兩個(gè)單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6可以容納六個(gè)單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24可以容納24個(gè)單獨的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50可以容納一個(gè)單獨的50 ml離心管，一個(gè)15ml的離心管，以及四個(gè)1.5ml離心管(Cat.# MS-04);
BcMag? separator-96 可以配合96 ELISA板和PCR板使用 (Cat.#MS-05).
操作過(guò)程
提示
l 一下操作過(guò)程是一個(gè)通用的親和純化操作。為了獲得最佳結果，每個(gè)用戶(hù)都應該根據所需要純化的目標蛋白確定最佳工作條件。
l 我們強烈建議用戶(hù)使用滴定法，根據粗樣品中目標生物素化分子的濃度（基于磁珠結合能力），優(yōu)化每次使用中添加的磁珠數量。使用過(guò)多的磁珠會(huì )導致過(guò)高的背景，而使用磁珠的量過(guò)少會(huì )導致產(chǎn)量降低。
1. 將最佳添加量的磁珠轉移到離心管中。將離心管放在磁力分離器上1-3分鐘，當磁珠完全沉淀時(shí)，去除上清液。
2. 取下試管，用5倍體積的PBS buffer通過(guò)渦漩清洗磁珠30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，當磁珠完全沉淀時(shí)，去除上清液。
3. 重復步驟2兩次。
4. 向含有目標分子的粗樣品中加入洗滌過(guò)的磁珠，并在室溫或所需溫度下培養1-2小時(shí)（溫度越低，培養時(shí)間越長(cháng)）。
提示：強烈建議進(jìn)行滴定實(shí)驗以?xún)?yōu)化培養時(shí)間。因為較長(cháng)時(shí)間的孵化可能會(huì )導致背景過(guò)
高。
5. 用5倍磁珠體積的PBS buffer或1M NaCl徹底清洗珠（可多次清洗），直到洗脫液在280 nm
處吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可能會(huì )降低非特異性背景。例如，向
洗滌緩沖液中添加NaCl（濃度為1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X-
100或吐溫20。
6.二硫鍵的切割
提示：由于配體之間的構象不同，用戶(hù)應確定最佳工作條件，如還原劑、pH值和溫度，以切割單個(gè)配體的二硫鍵。以下是從磁珠上切割共軛的GFP蛋白的示例。
1）在140 mMβ-巰基乙醇或5 mM DTT（二硫蘇糖醇）中孵育磁珠（30mg/ml）。
a. 在 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 140 mM β-巰基乙醇條件下，室溫2小時(shí)或
者過(guò)夜孵育，或者在98℃條件下5分鐘。
b. 在100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 5mM DTT條件下，室溫2小時(shí)或者過(guò)夜孵
育，或者在98℃條件下5分鐘。
