產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
IDA-His-標簽蛋白純化試劑盒
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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MHN101 |
BcMag? IDA-Ni His-標簽蛋白純化試劑盒 |
5 ml |
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MHN102 |
BcMag? IDA-Ni His-標簽蛋白純化試劑盒 |
10 ml |
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MHN103 |
BcMag? IDA-Ni His-標簽蛋白純化試劑盒 |
50 ml |
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MHO101 |
BcMag? IDA-Co His-標簽蛋白純化試劑盒 |
5 ml |
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MHO102 |
BcMag? IDA-Co His-標簽蛋白純化試劑盒 |
10 ml |
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MHO103 |
BcMag? IDA-Co His-標簽蛋白純化試劑盒 |
50 ml |
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產(chǎn)品屬性 |
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組成 |
表面連接有 Ni2+ 或者 Co2+磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化類(lèi)型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5 g/ml |
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濃度 |
100 mg/ml (1% NiSO4.6H2O or 1% CoCl26H2O) |
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結合能力 |
>2mg His-標簽 GFP /ml 磁珠 |
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儲存 |
儲存在 4°C |
運輸條件: 常溫運輸
儲存條件: 在4oC儲存試劑盒.
簡(jiǎn)介
BcMag? IDA 磁珠是直徑為5μm，高度均勻的，表面共價(jià)連接有高密度IDA（亞氨基二乙酸酯）基團的IMAC磁性微球。它被設計用于從各種類(lèi)型生物樣品中捕獲和純化帶有組氨酸標簽的重組蛋白質(zhì)。該微球結合了IMAC蛋白純化的所有優(yōu)點(diǎn)（（成本低、操作簡(jiǎn)單、高特異性和大容量）和磁性，在使用手動(dòng)操作或自動(dòng)化快速高通量純化操作過(guò)程都適用。Bioclone公司生產(chǎn)出兩種帶不同離子的IDA磁珠用于His-tag蛋白純化；BcMag? IDA-Ni2+磁珠和BcMag? IDA-Co2+磁珠。目前，最常用的蛋白純化金屬離子是鎳離子（Ni2+）用于His標簽融合蛋白的純化，因為它具有極高的結合量，而鈷離子（Co2+）可以提供純化蛋白更高的純度，但蛋白結合量較低。
Workflow
用磁性微粒進(jìn)行蛋白純化的操作過(guò)程非常簡(jiǎn)單（圖1）。只需要將磁性微粒與細胞裂解物混合，并連續旋轉培養足夠時(shí)間。在混合過(guò)程中，保持磁珠懸浮在樣品溶液中，使目標蛋白質(zhì)與被固定的配體充分結合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分離器將磁珠從樣品中分離。然后，用過(guò)含咪唑的洗脫緩沖液洗脫下純化后的His標簽的重組蛋白。
優(yōu)勢及特點(diǎn)
l 快捷，簡(jiǎn)單的一步法高通量操作;無(wú)需純化柱或過(guò)濾器，或重復移液、離心等操作。
l 穩定的共價(jià)鍵，最少的配體泄漏
l 極高結合能力，非常低的非特異性結合率
l 可根據實(shí)驗條件對樣品體積進(jìn)行調整，便于自動(dòng)化操作
l 產(chǎn)品重復效果好
產(chǎn)品應用
l 研究蛋白質(zhì)結構和功能
l X射線(xiàn)晶體學(xué)的重組蛋白的制備
l 是研究蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)或DNA相互作用的理想選擇材料
l 在免疫研究中，提高抗體與對應蛋白的結合和能力
l 即使使用粗細胞裂解液，也能有效篩選出表達的蛋白質(zhì)
l GST標簽蛋白的微量純化
背景信息
多聚組氨酸標簽，也稱(chēng)為6xHis標簽，和His標簽，是從各種表達系統（包括細菌、酵母、植物細胞和哺乳動(dòng)物細胞系統）中純化重組蛋白的通用工具。該標簽是位于重組蛋白的N或C末端的包含六個(gè)或更多個(gè)連續組氨酸的殘基。由于這個(gè)氨基酸鏈體積非常小，His標簽具有幾個(gè)獨特的特性，包括較少的免疫原性、親水性以及可在天然和變性條件下都可發(fā)揮作用的用途廣泛性。此外，不需要從重組蛋白上切割標簽，因為它不會(huì )干擾其融合蛋白的結構和功能。His標簽的純化原理基于固定化金屬離子親和層析（IMAC）。
固定化金屬離子親和層析（IMAC）是一種快速的親和純化層析技術(shù)，是基于攜帶his標簽的重組蛋白質(zhì)對Ni2+或Co2+的親和力從而達到分離目的，而Ni2+或Co2+則被結合固定到固相基質(zhì)表面，例如珠狀瓊脂糖或純化柱。在pH 7-8時(shí)，His標簽蛋白將與Ni2+或Co2+結合。His標簽重組蛋白質(zhì)的結合反應受到各種自變量的影響，如pH、溫度、鹽類(lèi)型、鹽濃度、固定化的金屬和配體密度以及蛋白質(zhì)大小?？赏ㄟ^(guò)降低pH梯度、增加咪唑濃度或在緩沖液中加入EDTA螯合劑來(lái)洗脫結合的蛋白質(zhì)。該技術(shù)是快速、直接捕獲和純化帶標簽重組蛋白的，高性?xún)r(jià)比的理想工具。
盡管IMAC是一種非常有效的蛋白質(zhì)純化技術(shù)，但這種技術(shù)主要用于傳統的親和層析基質(zhì)，如瓊脂糖樹(shù)脂或純化柱。使用這些固體基質(zhì)進(jìn)行純化過(guò)程非常繁瑣、耗時(shí)，無(wú)法處理體積非常微小的樣品，并且難以適應自動(dòng)化系統。因此，我們研發(fā)出了一種非常有效的磁珠IMAC分離產(chǎn)品來(lái)克服這些限制。
相關(guān)文獻
1. Jansen, J-C. (Editor). (2011). Protein Purification: Principles, High-Resolution Methods, and Applications. 3rd edition. Volume 151 of Methods of Biochemical Analysis. John Wiley & Sons, Hoboken, NJ
2. Bornhorst, J.A. and Falke, J.J. (2000). Purification of Proteins Using Polyhistidine Affinity Tags. Methods Enzymol. 326: 245-254.
3. Spriestersbach A, Kubicek J, Sch?fer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15. doi: 10.1016/bs.mie.2014.11.003. Epub 2015 May 4. PMID: 26096499.
4. Zhang C, Fredericks D, Longford D, Campi E, Sawford T, Hearn MT. Changed loading conditions and lysate composition improve the purity of tagged recombinant proteins with tacn-based IMAC adsorbents. Biotechnol J. 2015 Mar;10(3):480-9. doi: 10.1002/biot.201400463. Epub 2014 Oct 31. PMID: 25303209.
5. Pina AS, et al. (2014) Affinity tags in protein purification and peptide enrichment: An overview. Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) 1129: 147-168.
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