產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
分泌型His-標簽蛋白純化試劑盒
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貨號 |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品規格 |
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MHP101 |
BcMag? IDA-Ni His-標簽蛋白純化試劑盒 |
5 ml |
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MHP102 |
BcMag? IDA-Ni His-標簽蛋白純化試劑盒 |
10 ml |
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產(chǎn)品屬性 |
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組成 |
表面連接有 Ni2+的磁珠 |
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磁力大小 |
~60 EMU/g |
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磁化類(lèi)型 |
超順磁性 |
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穩定性 |
適用于pH 4-11,100%乙醇，100%甲醇，8M尿素，6M鹽酸胍， 20 mM DTT, 20mM EDTA |
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濃度 |
100 mg/ml (1% NiSO4.6H2O or 1% CoCl26H2O) |
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結合能力 |
>2mg His-標簽 GFP /ml 磁珠 |
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儲存 |
儲存在 4°C |
運輸條件: 常溫運輸
儲存條件: 在4oC儲存試劑盒.
簡(jiǎn)介
BcMag? 分泌型His標簽蛋白質(zhì)純化試劑盒是基于磁珠和一種獨特的、專(zhuān)有的負載鎳離子的配體合成的一個(gè)試劑盒。磁珠上配體的結合非常牢固，而且對His標簽蛋白質(zhì)具有極高親和力，即使在含有化學(xué)添加劑如螯合劑（EDTA）、強還原劑（DTT）或細胞培養上清液的組分的情況下也不會(huì )出現金屬離子浸出現象，盡管，這些化學(xué)添加劑具有剝離Ni離子并降低大多數IMAC磁珠作用的功能。His簽蛋白質(zhì)純化磁珠可以直接從可溶性細胞內蛋白質(zhì)提取物、HeLa、CHO哺乳動(dòng)物細胞或Sf9昆蟲(chóng)細胞培養上清液中有效純化His標簽重組蛋白質(zhì)。它們可以配合手動(dòng)與磁性分離器使用，也可以與自動(dòng)化儀器配合使用。它避免了大量耗時(shí)的樣品預處理過(guò)程，例如通過(guò)透析和濃縮操作進(jìn)行緩沖液交換。
磁珠產(chǎn)品與傳統色譜法如純化柱、瓊脂糖或非磁性樹(shù)脂相比具有顯著(zhù)優(yōu)勢?；诖胖榈奶匦?span>可以在約20分鐘內快速高產(chǎn)率處理96個(gè)樣品，重組蛋白可達到85%以上的純度。當使用基于色譜柱的技術(shù)實(shí)驗時(shí)，在科學(xué)研究實(shí)驗室處理多個(gè)樣品時(shí)，可能需要大量的手動(dòng)移液操作。這種移液操作會(huì )造成實(shí)驗和人之間目標生物分子產(chǎn)量的差異。實(shí)驗人員和學(xué)生可能需要大量的培訓和實(shí)踐才能產(chǎn)生恒定的蛋白質(zhì)產(chǎn)量。而且磁珠具有許多優(yōu)點(diǎn)，例如它們易于使用，快速的實(shí)驗方案，適用性以及高通量自動(dòng)化和小型化處理的便利性等。
操作流程
用磁性微粒進(jìn)行蛋白純化的操作過(guò)程非常簡(jiǎn)單（圖1）。只需要將磁性微粒與細胞裂解物混合，并連續旋轉培養足夠時(shí)間。在混合過(guò)程中，保持磁珠懸浮在樣品溶液中，使目標蛋白質(zhì)與被固定的配體充分結合。孵育后，收集磁珠，并使用磁力分離器將磁珠從樣品中分離。然后，用過(guò)含咪唑的洗脫緩沖液洗脫下純化后的His標簽的重組蛋白。
優(yōu)勢及特點(diǎn)
l 磁珠表現出比多孔載體更少的非特異性結合率。
l 穩定的共價(jià)鍵，最少的配體泄漏
l 在含有高達20mM EDTA和20mM還原試劑的情況下，磁珠不會(huì )發(fā)生鎳離子浸出現象。
l 與細胞培養基中過(guò)量表達、或分泌蛋白的純化兼容。
l 極高的蛋白純度
l 性?xún)r(jià)比高：無(wú)需使用純化柱、過(guò)濾器、有機試劑或進(jìn)行重復移液。
l 高通量：與許多不同的自動(dòng)化液體處理系統兼容。
產(chǎn)品應用
l 研究蛋白質(zhì)結構和功能
l X射線(xiàn)晶體學(xué)的重組蛋白的制備
l 是研究蛋白質(zhì)，與蛋白質(zhì)或DNA相互作用的理想選擇材料
l 在免疫研究中，提高抗體與對應蛋白的結合和能力
l 即使使用粗細胞裂解液，也能有效篩選出表達的蛋白質(zhì)
l GST標簽蛋白的微量純化
背景信息
多聚組氨酸標簽，也稱(chēng)為6xHis標簽，和His標簽，是從各種表達系統（包括細菌、酵母、植物細胞和哺乳動(dòng)物細胞系統）中純化重組蛋白的通用工具。該標簽是位于重組蛋白的N或C末端的包含六個(gè)或更多個(gè)連續組氨酸的殘基。由于這個(gè)氨基酸鏈體積非常小，His標簽具有幾個(gè)獨特的特性，包括較少的免疫原性、親水性以及可在天然和變性條件下都可發(fā)揮作用的用途廣泛性。此外，不需要從重組蛋白上切割標簽，因為它不會(huì )干擾其融合蛋白的結構和功能。His標簽的純化原理基于固定化金屬離子親和層析（IMAC）。
固定化金屬離子親和層析（IMAC）是一種快速的親和純化層析技術(shù)，是基于攜帶his標簽的重組蛋白質(zhì)對Ni2+或Co2+的親和力從而達到分離目的，而Ni2+或Co2+則被結合固定到固相基質(zhì)表面，例如珠狀瓊脂糖或純化柱。在pH 7-8時(shí)，His標簽蛋白將與Ni2+或Co2+結合。His標簽重組蛋白質(zhì)的結合反應受到各種自變量的影響，如pH、溫度、鹽類(lèi)型、鹽濃度、固定化的金屬和配體密度以及蛋白質(zhì)大小?？赏ㄟ^(guò)降低pH梯度、增加咪唑濃度或在緩沖液中加入EDTA螯合劑來(lái)洗脫結合的蛋白質(zhì)。該技術(shù)是快速、直接捕獲和純化帶標簽重組蛋白的，高性?xún)r(jià)比的理想工具。
盡管IMAC是一種非常有效的蛋白質(zhì)純化技術(shù)，但這種技術(shù)主要用于傳統的親和層析基質(zhì)，如瓊脂糖樹(shù)脂或純化柱。使用這些固體基質(zhì)進(jìn)行純化過(guò)程非常繁瑣、耗時(shí)，無(wú)法處理體積非常微小的樣品，并且難以適應自動(dòng)化系統。因此，我們研發(fā)出了一種非常有效的磁珠IMAC分離產(chǎn)品來(lái)克服這些限制。
相關(guān)文獻
1.Carlsson M, Granér T, Algotsson M, Andersson LC, Bj?rner M, Glad G, H?rnsten L, Le Greves P, Lindgren H, Lindqvist S, ?berg K, Hedlund H. New IMAC Media Enabling Purification of Histidine-tagged Proteins Directly From Eukaryotic Cell Culture Supernatants. J Biomol Tech. 2013 May;24(Suppl):S66.
2.Spriestersbach A, Kubicek J, Sch?fer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015;559:1-15.
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